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雞胰島細胞分離液試劑盒
雞胰島細胞分離液試劑盒
更新時間:2025-02-17
訪問量: 1438
廠商性質: 生產廠家

本品用于分離雞胰島細胞
Store at: RT° C Size :2X100ml/kit試劑盒內容
試劑:全血及組織稀釋液 100ml
試劑:細胞洗滌液 100ml
試劑B: 100ml
試劑D: 100ml
說明書 1份

雞胰島細胞分離液試劑盒產品概述:

操作說明 細胞分離液試劑盒操作說明::::

Store at:::RT 試劑盒規格::::2×100ml/Kit

雞胰島細胞分離液試劑盒試劑盒內容:

貨號                     品牌              產品名稱          規格         報價

LDS1083PTBD豚鼠臟器組織單個核細胞分離液100ml400
LDS1083ZTBD豚鼠腫瘤浸潤組織單個核細胞分離液100ml400
LDS1088CTBD雞外周血單個核細胞分離液100ml400
LDS1088CPTBD雞臟器組織單個核細胞分離液100ml400
LDS1088CZTBD雞腫瘤浸潤組織單個核細胞分離液100ml400
LDS1076TBD猴外周血單個核細胞分離液100ml400
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LDS1076ZTBD猴腫瘤浸潤組織單個核細胞分離液100ml400
LDS1108TBD豬外周血單個核細胞分離液100ml400
LDS1108PTBD豬臟器組織單個核細胞分離液100ml400
LDS1110CTBD豬腸黏膜組織單個核細胞分離液100ml400
LDS1108ZTBD豬腫瘤浸潤組織單個核細胞分離液100ml400
LDS1091TBD馬外周血單個核細胞分離液100ml400
LDS1091PTBD馬臟器組織單個核細胞分離液100ml400
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LDS1084YTBD羊外周血單個核細胞分離液100ml400
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LDS1084YZTBD羊腫瘤浸潤組織單個核細胞分離液100ml400
LDS1079FTBD魚全血單個核細胞分離液100ml400
LDS1079FPTBD魚臟器組織單個核細胞分離液100ml400

全血及組織稀釋液 100ml

細胞洗滌液 100ml

試劑 B 100ml

試劑 D 100ml

說明書 1

一、、、、分離方法說明及圖例

A. 10ml 15ml 玻璃離心管中依次小心加入 BD 兩種液體各 2ml,制成梯度界面(各液面分層一定要清晰);

B.取 1ml新鮮抗凝血與全血及組織稀釋液(Cat#2010C111911混合并小心加于D液之液面上;或取組織勻漿單細胞懸液(細胞濃度為2×108-1×109/ml,具體制備方法參照

“二、組織單細胞懸液的制備”)小心加于D液之液面上;

C. 400g(約1500/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉子);

此時離心管中由上至下細胞分為五層。*層;為血漿層或組織勻漿液層。第二層;為

富含胰島細胞的 D 液層。。。。第三層;為單個核細胞層。第四層;為透明 B 液層。第五層;為紅細胞層。收集第二層富含胰島細胞的 富含胰島細胞的 富含胰島細胞的 D 液層放入含 4-5ml 細胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 /分)離心 20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌 2 次即得所需胰島細胞。

注::::A. 提取率約為 80%。

注::::A.. .. 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,,,,酶消化法由于各實驗室選取的消化 酶消化法由于各實驗室選取的消化酶種類各不相同, 酶種類各不相同,,,請各實驗室自行選擇進行試驗 請各實驗室自行選擇進行試驗 請各實驗室自行選擇進行試驗。。。。全過程及所需試劑要求無菌環境 全過程及所需試劑要求無菌環境 全過程及所需試劑要求無菌環境。。。。 剪碎法::::將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網

(另購)過濾到試管內;離心沉淀 1500/分×3 min,再用細胞洗滌液清洗 3次,每次以 500rpm短時低速離心除去細胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾去細胞團塊。作細胞計數并調整細胞濃度為(25)×107/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109/ml 的單細胞懸液備用。

勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內,加入 2ml 組織勻漿液及 20% 勻漿器法胎牛血清;緩慢轉動研棒,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器;收集細胞懸液,經 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾;離心沉淀 800rpm×2min ,再用細胞洗滌液洗 3 次,離心沉淀。作細胞計數并調整細胞濃度為(25)×107/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109 /ml 的單細胞懸液備用。 細胞計數方法: 細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板(血球計數板)進行。既可用于分離(散)細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,也可用于

對培養物的細胞數量進行計數。不論計數的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。

1)、在細胞計數板中央放置計數的蓋玻片。

2)、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液,至

蓋玻片被液體充滿為止。

3)、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線的細胞只計數在上線和左線者,

對于細胞團按單個細胞計數。

4)、按下式計數細胞懸液的密度:

細胞密度=(4 個大格細胞總數/4)×104/ml×稀釋倍數

公式中乘以 104因為計數板中每一個大格的體積為:

1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3

  1ml1000mm3

細胞計數要點::::

A 進行細胞計數時,要求懸液中細胞數目不低于 104/ml,如果細胞數目很少要進行離

心再懸浮于少量培養液中;顯微鏡下計數時,遇到 2 個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分; 或細胞數<200 /10mm2>500 /10 mm2 時,說明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。

B 要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數準確性。

C 取樣前充分混勻細胞懸液,尤其多次取樣更要注意每次取樣都要混勻,以求計數準確;

D 數細胞的原則是只數完整的細胞,若細胞聚集成團時,只按照一個細胞計算。如果細

胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計左線,不計右線。

E 操作時,注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數。

初學者易犯的錯誤: 初學者易犯的錯誤:::

A 計數前未將待測懸液吹打均勻。

B 滴入細胞懸液時蓋玻片下出現氣泡。

C 滴入懸液時的量太多,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。

三、、、、注意事項

A 本分離液是敏光型的,運輸和貯藏過程中在 18-25避光保存,啟封后 4保存本品只能用于科學研究,不能用于臨床檢測

避免微生物污染。本品為真空包裝,未啟封前于 10 以下易出現白色結晶,影響分離效果。

B 待分離的血液及組織樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在

20水浴箱中復溫 20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在 20±2時分離效果,且

所有操作過程一定要在無菌條件下進行。

C 由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區溫度環境和四季差異,可能影響分離

效果,用戶可調節離心轉數及離心時間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。

D 使用無靜電反應的離心管,推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。

E *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑體積。

F 分離過程中所用其他試劑如:羥乙一基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液及

紅細胞裂解液等以我公司產品為*選擇,本公司相關系列產品無菌、無病毒、無支原體、

低內毒素水平且無細胞毒性,所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態。

四、、、、 產品性能指標

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

內毒素 0.5...EU/ml

無菌 直接接種培養 14 天后培養基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下

五、、、、 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限

18-25避光保存,有效期兩年。啟封后置 4保存,有效期一周。

注::::若保證無微生物污染,啟封后可置 4長期保存。但應注意保存溫度較低時本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。

 

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